流式細胞術是生命科學領域尤其是免疫學和診斷醫(yī)學研究中不可或缺的技術，由于其可進行單細胞水平的研究，并且兼具高通量和同時檢測多個參數(shù)的特點，流式細胞術的應用越來越廣泛。有了多色流式技術的加持和啟發(fā)，生命科學的研究越來越深入。但是由于科學研究的深入，需要同時檢測的指標越來越多，傳統(tǒng)流式由于熒光滲漏和自發(fā)熒光導致通道數(shù)量受限，又沒有太好的解決該瓶頸的方法，使得傳統(tǒng)流式的發(fā)展速度緩慢無法滿足日益深入的學科研究。

       為了解決這個問題，光譜流式的技術在借鑒傳統(tǒng)流式技術的基礎上應運而生，通過分析每個熒光素的光譜特征區(qū)別不同的熒光素，即使發(fā)射波長相似的熒光素如APC和AF647，由于其波形不同，在光譜流式中也能很好的解析開，可消除傳統(tǒng)流式中熒光間補償?shù)睦_，另外通過對特異性光譜的分析可以方便的消除自發(fā)熒光信號的干擾。因此，光譜流式相對于傳統(tǒng)流式來說可以同時檢測更多的參數(shù)，那么適配光譜流式的熒光素的開發(fā)是這項技術發(fā)展的核心。

      今天我們介紹BioLegend推出的適用于光譜流式的一種新的熒光素---PE/FireTM700。

       PE/Fire700是BioLegend Fire系列的熒光素，該系列熒光素具有很好的穩(wěn)定性，以及優(yōu)秀的熒光亮度，PE/Fire700的熒光亮度指數(shù)可達到5（最高指數(shù)為5），適用于稀有亞群以及蛋白豐度較低的指標的檢測。

PE/Fire700最理想的檢測平臺是光譜流式，比如Cytek? Aurora。

PE/Fire? 700在光譜流式平臺上的激發(fā)光譜（Excitation Spectra of PE/Fire? 700）

PE/Fire? 700在光譜流式平臺上的發(fā)射光譜（Emission Spectra of PE/Fire? 700）

       但是在一些高配的傳統(tǒng)流式細胞儀如BD FACSymphony?上也是適用的，其穩(wěn)定性要優(yōu)于替代染料PE/Cyanine5.5。

       很顯然，在傳統(tǒng)的流式平臺PE/Fire? 700和PE/Cyanine5.5是不可以使用在同一個panel中的，但是在光譜流式中，兩種熒光染料由于其光譜特性存在一定的差異，是可以區(qū)分開：

    在5激光Cytek? Aurora 光譜流式平臺上，檢測人裂紅后外周血的CD4和CD19。PE/Fire? 700-CD19和PE/Cyanine5.5-CD4共染方案與PE/Fire? 700-CD19和PE-CD4共染方案得到了相似得陽性信號，說明在光譜流式平臺PE/Fire? 700和PE/Cyanine5.5是有可能在一個panel中共用的，但是配色方案可以更加優(yōu)化。

PE/Fire? 700光穩(wěn)定性

       PE/Fire? 700 和PE/Cyanine5.5標記的兩種CD4抗體檢測人PBMC，無論在避光條件下還是暴露在熒光的條件下，PE/Fire? 700的穩(wěn)定性要優(yōu)于PE/Cyanine5.5（檢測平臺為5激光Cytek? Aurora 光譜流式）。

PE/Fire? 700熱穩(wěn)定性

將PE/Fire? 700標記的抗體分裝后分別保存在4℃、22℃和37℃下。穩(wěn)定性可以根據(jù)抗體的染色指數(shù)（staining index）和熒光補償百分比來衡量，隨著保存時間的延長，3種溫度保存條件下光補償百分數(shù)并沒有發(fā)生改變，但是37℃的保存條件染色指數(shù)下降了約36%，22℃保存條件的染色指數(shù)下降了約12%，這主要是由于這兩種保存條件下抗體的非特異性染色背景升高引起的（檢測平臺為5激光Cytek? Aurora 光譜流式）。

PE/Fire? 700在固定劑中的穩(wěn)定性

PE/Fire? 700 和PE/Cyanine5.5標記的兩種CD4抗體檢測人裂紅外周血，抗體孵育完成后在固定洗滌馬上去檢測條件下和過夜后的條件下，在5激光Cytek? Aurora 光譜流式平臺檢測，PE/Fire? 700 在不同的實驗方案中對多聚甲醛的固定具有穩(wěn)定的抗性，表現(xiàn)出比PE/Cyanine5.5更優(yōu)秀的穩(wěn)定性，但是在磷酸化指標的檢測方案中，PE/Fire? 700熒光素的穩(wěn)定性出現(xiàn)了一定程度的下降。